内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.11.008

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (11): 1793-1798.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.11.008

内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定

鲍文蕾，其布日，姚睿原，郭志新，朝格图，王彦凤，王志钢^*

（内蒙古大学生命科学学院，呼和浩特 010021）

收稿日期:2014-01-25 出版日期:2014-11-23 发布日期:2014-11-23
通讯作者: 王志钢，教授， Tel：+86-471-4992435，E-mail：lswzg@imu.edu.cn
作者简介:鲍文蕾（1986-），女，内蒙古赤峰人，博士生，主要从事微生物和动物基因工程研究，E-mail：bwlnhm@sina.com
基金资助:
国家自然科学基金（31160469）；国家转基因重大专项（2013ZX08008-002）

Cloning FGF5 from Inner Mongolia Cashmere Goat and Construction and Identification of shRNA Expression Vectors Targeting FGF5 Gene

BAO Wen-lei，HE Qi-buri，YAO Rui-yuan，GUO Zhi-xin，BAO Chao-getu，WANG Yan-feng，WANG Zhi-gang^*

（College of Life Science，Inner Mongolia University，Hohhot 010021，China）

Received:2014-01-25 Online:2014-11-23 Published:2014-11-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ（Fibroblast growth factor 5，FGF5）基因shRNA真核表达载体（pRNAT-shRNA）。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板，PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列，分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中，构建重组干扰质粒载体pRNAT-shRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3，用脂质体Lipofectamine^TM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞，Real time PCR检测FGF5 mRNA表达量。结果表明：克隆获得813 bp的目的基因，包含了完整的ORF，编码270个氨基酸。核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因（NM_001246263.1）及氨基酸序列同源性均为99%。FGF5基因shRNA 重组质粒经测序鉴定证明构建成功。重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞 48 h 后可见绿色荧光表达；pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的 mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组（P<0.01），pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应。综上表明，成功构建pRNAT-U6.1/Neo- FGF5表达载体，为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础。

Abstract:

To construct the shRNA vector（pRNAT-shRNA） for Inner Mongolia Cashmere goat fibroblast growth factor 5（FGF5）.Total RNA as templates was extracted from Inner Mongolia Cashmere goat fetal fibroblasts（GFb） cells，FGF5 CDs was amplified by PCR.Three shRNA sequences targeting FGF5 were designed and linked with interference vector pRNAT-U6.1/Neo，labeled as pRNAT-shRNA1，pRNAT-shRNA2 and pRNAT-shRNA3，which were transfected into GFb cells by lipofectamine^TM2000.FGF5 mRNA expression was detected by real time PCR.The results showed that the cloned FGF5 CDs from Inner Mongolia Cashmere goat was 813 bp in length including integral ORF which encodes 270 amino acids residues.The homology of nucleotide sequence and predicted amino acid sequences were all 99% compared with ovis aries FGF5.pRNAT-shRNA was constructed successfully.Green fluorescence could be seen from transfected cells for 48 h.FGF5 mRNA expression levels were significantly lower than control group（P<0.01） in transfected pRNAT-shRNAs groups，The interference effect of pRNAT-shRNA2 group was the best in 3 groups.pRNAT-shRNA vector may provide a novel applicable strategy for the function of FGF5 in hair follicle.

中图分类号:

S827.2

鲍文蕾，其布日，姚睿原，郭志新，朝格图，王彦凤，王志钢. 内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(11): 1793-1798.

BAO Wen-lei，HE Qi-buri，YAO Rui-yuan，GUO Zhi-xin，BAO Chao-getu，WANG Yan-feng，WANG Zhi-gang. Cloning FGF5 from Inner Mongolia Cashmere Goat and Construction and Identification of shRNA Expression Vectors Targeting FGF5 Gene[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(11): 1793-1798.

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.xmsyxb.com/CN/10.11843/j.issn.0366-6964.2014.11.008

https://www.xmsyxb.com/CN/Y2014/V45/I11/1793

参考文献

［1］PAUS R，COTSARELIS G.The biology of hair follicles ［J］.N Engl J Med，1999，341（7）:491-497.
［2］HARDY M H.The secret life of the hair follicle ［J］.Trends Genet，1992,8（2）:55-61.
［3］ZHAN X，CULPEPPER A，REDDY M，et al.Human oncogenes detected by a defined medium culture assay ［J］.Oncogene，1987,1（4）:369-376.
［4］ZHAN X，BATES B，HU X G，et al.The human FGF-5 oncogene encodes a novel protein related to fibroblast growth factors ［J］.Mol Cell Biol，1988,8（8）:3487-3495.
［5］ESWARAKUMAR V P，LAX I，SCHLESSINGER J.Cellular signaling by fibroblast growth factor receptors ［J］.Cytokine Growth Factor Rev，2005,16（2）:139-149.
［6］ITOH N，ORNITZ D M.Evolution of the FGF and FGFR gene families ［J］.Trends Genet，2004,20（11）:563-569.
［7］ORNITZ D M，ITOH N.Fibroblast growth factors ［J］.Genome Biol，2001,2（3）：3005.
［8］ITOH N，ORNITZ D M.Functional evolutionary history of the mouse FGF gene family ［J］.Dev Dyn，2008,237（1）:18-27.
［9］CHEN Z，WANG Z，XU S，et al.Characterization of hairless（Hr） and FGF5 genes provides insights into the molecular basis of hair loss in cetaceans ［J］. BMC Evol Biol，2013,13:34.
［10］HEBERT J M，ROSENQUIST T，GOTZ J，et al.FGF5 as a regulator of the hair growth cycle：evidence from targeted and spontaneous mutations ［J］. Cell，1994,78（6）:1017-1025.
［11］SUZUKI S，OTA Y，OZAWA K，et al.Dual-mode regulation of hair growth cycle by two FGF-5 gene products ［J］.J Invest Dermatol，2000,114（3）:456-463.
［12］PETHÖ-SCHRAMM A，MÜLLER H J，PAUS R.FGF5 and the murine hair cycle ［J］.Arch Dermatol Res，1996,288（5-6）:264-266.
［13］HOUSLEY D J，VENTA P J.The long and the short of it：evidence that FGF5 is a major determinant of canine 'hair'-itability ［J］.Anim Genet，2006,37（4）:309-315.
［14］KEHLER J S，DAVID V A，SCHAFFER A A，et al.Four independent mutations in the feline fibroblast growth factor 5 gene determine the long-haired phenotype in domestic cats ［J］.J Hered，2007,98（6）:555-566.
［15］李春笑，蒋美山，陈仕毅，等.兔成纤维细胞生长因子5（FGF5）基因SNP及其与产毛量的相关分析［J］.遗传，2008，30（7）：893-899.
［16］刘海英，杨桂芹，张微，等.FGF5基因对内蒙古绒山羊绒毛性状的影响［J］.遗传,2009，31(2）：175-179.
［17］HATTORI Y，YAMASAKI M，ITOH N.The rat FGF-5 mRNA variant generated by alternative splicing encodes a novel truncated form of FGF-5 ［J］.Biochim Biophys Acta，1996,1306（1）:31-33.
［18］高爱琴，李宁，李金泉，等.山羊FGF5基因cDNA 分子克隆及序列分析［J］.内蒙古大学学报(自然科学版），2006，37(2)：180-184.

[1]	严晓春, 习海娇, 李金泉, 王志英, 苏蕊. 内蒙古绒山羊绒毛性状基因组育种值估计准确性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 120-128.
[2]	张晨俭, 李隐侠, 丁强, 刘伟佳, 王慧利, 何南, 吴家顺, 曹少先. CRISPR/Cas9技术高效制备山羊SOCS2基因编辑胚胎[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 129-141.
[3]	孟秋赤, 卢光玉, 陈定双, 林亚秋, 王瑞龙, 钟朝崧, 王永, 刘伟, 王友利, 李艳艳, 李志雄. 山羊GPR35基因表达特性分析及对皮下脂肪细胞分化作用的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 4993-5007.
[4]	何志成, 秦晓晨, 吕永强, 李秀金, 边会龙, 罗军, 李聪. 萨能奶山羊体尺性状的多元逐步回归分析与生长曲线拟合[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5301-5311.
[5]	张任豹, 周东辉, 周李生, 高霄霄, 柳楠, 贺建宁. 基于70 K SNP芯片分析济宁青山羊保种群体的遗传结构[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(7): 2836-2847.
[6]	邵钺馨, 张新钰, 葛丽岩, 史怀平. 西农萨能奶山羊ATF4基因克隆及其功能初步研究[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(6): 2353-2364.
[7]	许甜甜, 张彤彤, 王蒙, 王昕. 转录因子Foxq1通过WNT/β-catenin信号通路影响绒山羊毛囊干细胞增殖的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(6): 2653-2661.
[8]	曲比伍且, 李艳艳, 李鑫, 王永, 王友利, 刘伟, 朱江江, 林亚秋. 山羊APOA4基因抑制肌内脂肪细胞分化[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(5): 1927-1938.
[9]	马克岩, 韩金涛, 白雅琴, 李讨讨, 马友记. 基于简化基因组测序的永登七山羊遗传多样性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(5): 1939-1950.
[10]	朱俊儒, 韦唯, 裴党帅, 张芬鹊, 段瑜, 郭永峰, 江悦, 夏树立, 韩静, 侯金星, 安小鹏. PDCD4对奶山羊乳腺上皮细胞的凋亡及β-酪蛋白和TG合成的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(4): 1429-1440.
[11]	陈灿灿, 蒋婧, 孙晓燕, 任航行, 李杰. AGRP基因在山羊组织表达及其对黑色素生成的作用机制[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(4): 1441-1451.
[12]	叶峻宁, 邓铭, 薛慧雯, 柳广斌, 邹娴, 孙宝丽, 郭勇庆, 刘德武, 李耀坤. 影响山羊胎儿肌肉发育mRNA和lncRNA的鉴定与分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(3): 989-1002.
[13]	李晓波, 刘占发, 刘悦, 陈倩, 马月辉, 赵倩君, 叶绍辉. 基于WGCNA与GSEA方法挖掘调控中卫山羊羊毛弯曲相关基因[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(9): 2930-2943.
[14]	孙浩, 者小书, 张文奇, 郝斐, 李文楠, 刘洁, 刘东军. 毛壳素对绒山羊ADSCs组蛋白甲基化修饰的影响研究[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(7): 2380-2389.
[15]	刘珂含, 王永, 李艳艳, 王重洋, 朱江江, 熊燕, 李安, 林亚秋. SRSF10对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(6): 1768-1778.

内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定

Cloning FGF5 from Inner Mongolia Cashmere Goat and Construction and Identification of shRNA Expression Vectors Targeting FGF5 Gene

RichHTML

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价